2025年7月11日，瑞典乌普萨拉大学Landegren教授领衔、Navinci Diagnostics公司参与的多学科团队，将一项新技术——多重邻近连接（misPLA）——的重量级成果，发布在生物学预印本平台bioRxiv。文章凭借“单细胞分辨率+蛋白互作图谱”直接将肿瘤激活信号“画”出来。今天，我们就带大家精读其中最具冲击力的一张荧光图，让霍奇金淋巴瘤三大亚型和胸腺瘤瞬间“现形”。

图1 多重原位邻近连接技术（misPLA）的检测策略（Löf et al., 2025）。

01 研究背景：形态学“撞脸”，分子层面“各怀鬼胎”

显微镜下，霍奇金淋巴瘤（HL）的亚型之间只有“一字之差”，治疗反应和预后却大相径庭：混合细胞型（MC）和淋巴细胞减少型（LD）进展快、耐药多；淋巴细胞为主型（LP）则相对温和；胸腺瘤B3更是经常被误诊为淋巴瘤。

传统免疫组化一次只能看1-2个蛋白，难以同时捕捉多条信号通路的空间活性。作者希望用“一次染色、九重互作、原位成像”的misPLA，把MAPK、JAK/STAT、PI3K等核心通路同时“点亮”，让肿瘤自己“说”出是哪一型。

02 研究方法

①样本来源

4例石蜡包埋组织：右颈MC、颈LD、左颈LP、纵隔B3型胸腺瘤。

②探针设计

9对一抗分别偶联不同寡核苷酸，构成九套“分子插头”。

当两个目标蛋白距离<40 nm，可连接成环状DNA，经滚环扩增（RCA）生成数百拷贝的荧光探针结合位点，显微镜下呈1 μm亮斑——1个点=1次真实互作。

③成像策略

通道循环洗脱-重杂交：每轮读3种荧光，共三轮读完9个互作。

03 实验结果：一张图读出四种肿瘤的“蛋白互作图谱”

（1）霍奇金淋巴瘤（HL）三种亚型对比

①MC和LD型

EGFR–GRB2和GRB2–MEK1互作信号强，表示MAPK通路高度激活，与肿瘤侵袭性一致。STAT3–STAT5a互作信号也较强说明JAK/STAT通路活跃，可能促进细胞存活和增殖。

②LP型

EGFR–GRB2互作信号弱，但GRB2–MEK1仍可检测，提示MAPK通路上游激活较弱，但下游仍有一定活性。STAT3–STAT5a互作信号稀疏，JAK/STAT活性较低，符合其较低恶性度的特征。

（2）胸腺瘤B3型

JAK2–JAK3相互作用最强，提示JAK/STAT通路在该肿瘤中占主导地位。MAPK通路活性较低（EGFR–GRB2和GRB2–MEK1信号弱），与胸腺上皮来源的肿瘤生物学行为一致。

图2 分析蛋白互作揭示淋巴瘤及胸腺瘤中的细胞信号特征（Löf et al., 2025）。

通过misPLA技术展示了不同肿瘤组织中信号通路的“激活指纹”，可以：

①区分形态相似但分子特征不同的肿瘤；

②揭示哪些信号通路在特定肿瘤中被激活；

③为靶向治疗选择提供依据（如MAPK或JAK/STAT抑制剂）。

未来，随着探针库扩大到上百重、AI辅助判读成熟，misPLA有望成为肿瘤分子分型的“一站式”工具，让每位患者在第一时间拿到属于自己的“通路肖像”和治疗方案。

参考文献

Löf L, Xu B, Sinha TK, et al. Spatial mapping of proteins and their activity states in cancer models by multiplex in situ PLA[J]. bioRxiv,2025:2025.07.11.662357.